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Frühe Schwangerschaft Faktor (EPF) ist ein sezerniertes Protein mit wachstumsregulierenden und immunmodulierende Eigenschaften. Es ist eine extrazelluläre Form des Proteins mitochondriale Matrix Chaperonin 10 (Cpn10), einem molekularen Chaperon. Ein Verständnis des Mechanismus der Wirkung von EPF und eine Untersuchung der therapeutischen Potentials wurde durch die Verfügbarkeit von gereinigtem Material beschränkt. Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, um eine einfache Hochzins Verfahren zur Herstellung von Material für die Struktur / Funktionsstudien, die bis zur therapeutischen Anwendung skaliert werden könnte zu entwickeln. Menschliche EPF wurde in Sf9-Insektenzellen mit Baculovirus-Infektion und in Escherichia coli unter Verwendung eines wärme induzierbaren Vektors exprimiert. Modifiziertes Molekül mit einem zusätzlichen N-terminalen Alanin wurde ebenfalls in E. coli exprimiert. Das lösliche Protein wurde aus Zelllysaten durch Anionenaustausch (negative-Bindungsmodus), Kationenaustausch und Hydrophobchromatographie bzw. gereinigt, was ca. 42 und 36 mg EPF von 300 ml Bakterien und 1L Sf9 Kulturen. Die Präparate wurden hochgereinigte (# 10878; 99% Reinheit auf SDS-PAGE für die bakterielle Produkte und # 10878; 97% für die von Insektenzellen) und hatte die erwartete Masse und heptamere Struktur unter nativen Bedingungen, wie durch Massenspektrometrie und bestimmt Gelpermeationschromatographie, auf. Alle rekombinanten Zubereitungen zeigten Aktivität im EPF Bioassay der Rosette Hemmtest mit ähnlicher Potenz beide miteinander und mit dem nativen Molekül. In zwei in-vivo-Untersuchungen der immunsuppressive Aktivität, die Überempfindlichkeitsreaktion vom verzögerten Typ und experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis, Nike Shox Schuhe Damen die Insektenzelle und modifizierte bakterielle Produkte, beide mit N-terminale Additionen (Acetylierung oder Aminosäure), zeigten ein ähnliches Nike Shox Schuhe Auf Rechnung Niveau der unterdrückende Aktivität, aber die Bakterienprodukt ohne N-terminalen Modifizierung hatte keinen Effekt in beiden Assays. Studien von anderen haben gezeigt, dass N-terminal zusätzlich ist für Cpn10 Aktivität notwendig. Durch die Definition von Techniken für die einfache Herstellung von Molekülen mit und ohne immunsuppressive Eigenschaften, stellen die vorliegenden Studien lassen sich Mechanismen, die Unterscheidung zwischen EPF und Cpn10 Aktivität zugrunde zu erkunden.

 


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